Kako Izvleček DNK iz rastlinskih Leaves

Obrat je organska snov , sestavljena iz številnih celic , od katerih vsako vsebuje DNK , ki ima navodila za rast in funkcijo . Znanstveniki morda želeli študirati del ali vse genetskega materiala , prisotna v celicah , zato potrebujejo za varno izločiti DNK iz gradbenega materiala in strojev celic , ki obdaja it.Things boste potrebovali
2 gramov listov
pestilo in malto
za centrifuge
vodni kopeli
ravnovesje
Gaza
Six 15ml Centrifuga cevi
Ena 1,5 ml Eppendorf tube
100ml CTAB Extraction buffer
2ml Beta merkpatoetanol
7 ml 24 : 1 kloroform : izoamilalkohola zmes
50 mikrolitri RNase A v koncentraciji 10 mg /ml
Pipete
6 ml izopropanola
2 ml 70 % etanola
1ml sterilni deionizirani vodi

Prikaži več Navodila

1

Izpolnite vodno kopel na priporočeni ravni z vodo, ki se spreminja s specifikacijami vsakega proizvajalca , in ga vklopite . Nastavite vodno kopel na 65 stopinj Celzija , in dovolite, da bi prišel do temperature . Posodo postavimo izopropanola na ledu . Nastavite centrifugira pri 3000 obratih na minuto pri temperaturi 20 stopinj Celzija .
2

odtehtamo 2 g listov na ravnotežju in jih postavite v možnarju . Dodajte dovolj beta merkpatoetanol pomočjo pipete posodi s ekstrakcijskega pufra , da jekončni produkt , ki ga sestavljajo eden do dva odstotka beta merkaptoetanola . Na primer, če imate volumen pufra , ki meri približno 100 ml , nato dodamo 2 ml beta merkpatoetanol na posodo in dobro premešamo.
Kupi 3

pipeta 7 ml ekstrakcijskega pufra v malti . Crush mešanico v homogeno tekočino s pestilom .
4

Zložljiva kos gaze nad da tvorita štiri plasti . Sev in stisnite tekočino skozi plasti v 15 -mililitrsko epruveto za centrifugiranje.
5

Postavite epruveto v vodno kopel za 60 min 30to prestaviti . Obračajte cev se njena vsebina premeša vsak četrt ure . Pustimo, da se cev , da se ohladi na sobno temperaturo , ko jepolna obdobje največ .
6

Najbolje secev s kloroformom in izoamilalkohola zmesi ( ta vsebuje 24 delov kloroform enega dela izoamilalkohola ) , tako epruveta vsebuje približno polovica vzorca in pol nov tekoči dodatek. Cap cev in nekajkrat jo obrniti na glavo počasi, tako mešanic tekočin .
7

Postavite epruveto v centrifugo in pustite, da se zavrti za 10 minut.
8

Place 50 ml RNazo a v novo centrifugirko . Odpipetiramo supernatant (bistra plast na vrhu cevi nad belo plast drobirja ) v prvi epruveti off in ga premakniti na drugo cev . Cap cev in ga obrnemo nekajkrat premešamo vsebino skupaj. Vsebnik shranjujte na sobni temperaturi eno uro .
9

Izvedite korake 6 in 7 znova dvakrat , tako da imate jasen epruveto . Nato pipetiramo do 9 ml bistre tekočine iz končnega cevi v novo epruveto . Dodaj 6 ml izopropanola in invertnega so cevi 10 -krat v rahlem način,DNK pade iz raztopine in v trdni obliki . Nato centrifugira epruveto za 10 minut , ki naj ustvarjajo peleto DNA pri dnu cevi .
10

Odlijte tekočino v cev tako ostaja pelet . Odpipetiramo v 2 ml 70 % etanola in prosto nazaj v centrifugi za pet minut . Spet odlijte tekoči del . Uporabite sterilno vrh pipete , da poberem kroglico in jo preseliti v sterilno 1,5 - ml Eppendorf tube. Odpipetiramo v 200 ul sterilne deionizirane vode in pustimoDNA popolnoma raztopi v tekočini , ki lahko sprejme preko noči . Vzorec je nato pripravljena za analizo.