Kako pripraviti visečo kapljico

Za določitev 3D strukturo proteina , morate najprej čisti kristal njej . Metodavisi - drop uporablja kapljice , ki vsebujejo proteinsko raztopino visi z stekelcem . Pod tem visi padec leži rezervoar z višjo koncentracijo soli , kot da padca . Sčasoma , vodna para zapusti padec in konča v rezervoarju , kar povzroča protein kristalizira . Vsak protein zahteva drugačne pogoje (kot je koncentracija soli in pH ) , pogosto poskusov in napak ponuja edini način, da bi našli prave conditions.Things kar potrebujete
laboratorijsko haljo , zaščitne rokavice in zaščito za oči
mikropipeta z pipeto nasveti
1 molarno raztopino natrijevega klorida pri 0,05 -molarne acetatnega pufra , pH 4,7
2 ml Eppendorf cevi ( ali podobno )
centrifuga,
24 vdolbinami
Vacuum mast v brizgi Spremeni jezik silikoniziran pokrovni
stisnjeni zrak
Pincete
Clay ( npr modeliranje gline ali podobno)
50 mg /ml lizocima v 0,05 -molarne acetatni pufer , pH 4,7 na
Prikaži več navodil

1

Daj na vajah prestavo ( plašč, rokavice in zaščito za oči ).
2

z mikropipeto dodati 1,1 ml natrijevega klorida ( soli ) in acetatnega pufra v Eppendorf tube .
3

Centrifugazaprt Eppendorf tube z raztopino soli znotraj njega za približno pet minut pri 13000 vrtljajih na minuto . Ne pozabite, da uravnoteženje centrifugo z dajanjem drugega Eppendorf cev , ki vsebuje 1,1 ml vode nasproti in nasproti raztopino soli cevi .
4

Dodamo 1 ml raztopine soli, da setudi pri24 -well plate .
5

Uporabite - mazalno injekcijsko brizgo , da se s tanko plastjo maščobe okoli roba to dobro . Pazite, da ne dodamo premalo ali preveč . Če dodate preveč masti , mast spuščajo v vodnjaku in morda pokvaril svoj ​​eksperiment . Če ste uporabili premalo ,tudi ne bo nepredušno in vaš poskus ne bo delovala . Prizadevati za ravno dovolj maščobe , dapokrovni in masti tvori nepredušno tesnilo kasneje .
6

Roll glino z rokami , da bi štiri majhne kroglice in jih potisnite na štirih vogalih24- dobro ploščo . Delovala bo kot podpira , da se zagotovi kritje plošče ne pride v stik s stekelcem .
7

Uporaba stisnjen zrak pihati prah off stekelcem . Držite krovno s parom čistih pinceto.
8

Prilizuj 4 pl raztopine lizocimskega s svojim mikropipeto , in to raztopino dodamo na sredini stekelcem . Spremenite konice pipet , in dodamo 4 pl raztopine soli . Nežno odpipetiramo gor in dol , sesanje v tekočino ga izžene , zmešajte raztopino soli z raztopino lizocimskega . Bodite pozorni , da zmešate dve brez razprševanjetekočine po vsem stekelcem .
9

Obrnite krovno nad hitro, tako da tekočina ne zdrsne , in sredstev, ki jo odkrito vrhudobro . Bodite pozorni , da nežno pritisnete na njej , tako da tvori nepredušno zaporo z mastjo po vsem robovihdobro .
10

Potisnite pokrov 24 vdolbinami na glinenih kroglic in pustite plošča v hladnem prostoru .