Kako najti pH citoplazme

Potencialna vodik ali pH , jemerilo kislosti ali alkalnosti tekočine . Pomembno je, da na številnih področjih , vključno z biologijo , kemijo in znanosti o okolju . Merjenje pH je preprosta, v večini primerov . Se lahko vstavi lakmusovim papirjem v fluid , inspremembe v barvi papirja določa stopnjo, do katere jetekočina kislino ali bazo. V primerih, kjer je tekočina , ki se preskuša znotraj celice , druge metode, morajo biti devised.Things kar potrebujete
2 ', 7'- bis - ( 2 = karboksietil ) -5 ( in -6 ) - karboksifluorescein ( BCECF ) , ali druga snov , ki je različno fluorescence pri različnih pH jezik fluorescenčni spektrometra z dvojnimi monokromatorji ali podobnega instrumenta za merjenje fluorescence
Centrifuga
vnaprej določeno kalibracijske krivulje merilne korelacijo medceličnega BCECF in citoplazemske pH

Prikaži več navodil
1

cool temperature vzorca celic na 41 do 50 stopinj Celzija . To omogoča boljšo stopnjo absorpcije fluorescentne snovi v celicah .
2

celičnem vzorcu naložiti s fluorescenčno induciranje snovi, kot so BCECF . To se izvede z dodajanjem BCECF celični medij , nato mešanje mešanice nežno 2,5 ure . BCECF se absorbira skozi membrano celic .
3

Ločite celic iz medija in vse neabsorbiranega BCECF s tekom vzorca skozi centrifugo . Put celice v ločeni posodi .
4

segrejemo celičnega vzorca na 98,6 stopinj Celzija za 30 minut , približati pogoji v človeškem telesu . Če so celice, ki jih pregleda običajno živijo v nekem drugem okolju, kot je človeško telo , prilagodili vzorec na primerno temperaturo .
5

vzorec celic Excite z mešanjem. To pomaga povečati fluorescentno dejavnost .
6

Izmerite fluorescenčno intenziteto vzorca celic z uporabo spektrofotometra . Za najboljše rezultate uporabite vzbujanja svetlobo pri valovni dolžini 500-510 nanometrov . Na teh valovnih dolžinah , jevečja širjenje fluorescentno intenziteto , tako da je lažje razlikovati rezultate . Fluorescentna intenzivnost se meri v relativnih fluorescenčnih enot ( RFU ) ,razmerje svetlosti snovi v vzbujenem stanju , fluorescentna v normalno , unexcited stanju . VišjeRFU ,svetlejšisnov , v primerjavi z normalno stanje .
7

Primerjajte rezultate spektrofotometer vnaprej pripraviti kalibracijske krivulje . Na splošno višja fluorescentno pomeni višjo pH v vzorcu . Pri valovni dolžini vzbujanja 510 nm , bisnov s pH 6,4 kažejo RFU okoli 20 , medtem ko naj bisnov s pH 9,9 kažejo RFU približno 55 .