Metode za Kvas Tri hibridnega sistema

replikacije kromosomov , predelave messenger RNA , prevajanje proteinov in kritičnih odločitev v zgodnjih fazah razvoja odvisna od interakcije DNA, RNA in proteinov . Te interakcije so osnovne biološke procese izražanja genov in sintezo beljakovin . Znanstveniki pogosto uporabljajo Saccharomyces cerevisiae, iste vrste kvasovk , ki se uporabljajo pri peki in pivovarstvo , za študij genov , ki kodirajo za določene proteine ​​in analizo interakcij med proteinov in drugih molekul . Kvas tri - hibridnega sistema je eden od treh variant kvasne dvo - hibridnega sistema , ki se uporablja za preučevanje teh povezav . Two- hibridni sistem

metodadva hibridna se uporablja za odkrivanje interakcij protein -protein , ki ga iščete za izražanje reporterskega gena . Mnogi proteini imajo vsaj dve domeni ali diskretne strukturne in funkcionalne enote. GAL4 ,beljakovine v Saccharomyces cerevisiae , je z veznim področjem DNA ( DBD ) in aktivacijsko področje (AD) . Pri tej metodi je eden hibridni protein pripojen na DBD indrugi za AD . Št reporterski gen izraža s fuzijo le eden od hibridov . Ker je genGaL4 novinar izražena le, če so prisotni obe hibridi, ki je naveden interakcij protein - protein .
Three- hibridni sistem

tri hibridne metode opredeljuje reporterski gen za odkrivanje interakcij proteina z RNA . Prvi hibridni protein sestoji iz DBD kondenziranega neposredno z veznim področjem RNA . Druga pa Ad za transkripcijskega faktorja GAL4 povezan s proteinom, ki veže RNA . RNA, ki jo vezavni domeni interakcijo s hibridno molekulo RNA , ki veže dva hibridna proteina , da se tvori kompleks . Tvorba kompleksa sproži ekspresijo gena GAL4 reporterskega . Ker jereporterski gen vključi samo z ustanovitvijo treh hibridnega kompleksa , njegova prisotnost pomeni interakcijo RNA in beljakovin .
One- hibridni sistem

Postopek enem hibridni uporabljajo za odkrivanje interakcij proteina z DNK . One- hibridni sistem varovalke enoten beljakovin, ki povezuje AD neposredno DBD . Namesto identificiranje reporterski gen , ta metoda išče specifičnega proteina , ki mora prepoznati ciljno zaporedje DNK . Prisotnost posebnega proteina kaže interakcij proteina z DNK.
Hibridni sistem One- Two

jeena-dva hibridna metoda, uporabljena za študij protein - beljakovin in beljakovin DNK interakcije hkrati. S pomočjo novo razvite kvasovke , ta metoda uporablja gen GaL4 reporter , da prepoznajo protein -protein interakcije in p53 soglasje za ugotavljanje interakcije protein - DNA . Postopek naj bi se močno poveča natančnost eksperimentalnih rezultatov z zmanjšanjem pojav lažnih pozitivnih rezultatov , pridobljenih v drugih hibridnih sistemov .